Newsletter Fitoterapia nr. 60 – Settembre 2021

Withania somnifera: un versatile tonico immunitario nel periodo invernale.

 

Immunomodulatory Effect of Withania somnifera (Ashwagandha) Extract—A Randomized, Double-Blind, Placebo Controlled Trial with an Open Label Extension on Healthy Participants. 

 

Azione immunomodulatoria di Withania somnifera Dunal

Per migliaia di anni, i principali sistemi di medicina tradizionale hanno fatto affidamento su un gruppo di piante medicinali ritenute “ringiovanenti” o “ferma tempo” (Rasayana in Ayurveda) sulla base di una loro primaria conoscenza come piante medicinali adattogene e antistress. In questo gruppo di piante una delle più studiate è la Withania somnifera Dunal (Ashwagandha) e la moderna ricerca scientifica ha concluso che i generali effetti tonici di Withania somnifera dipendono anche da una sua potente capacità di agire in modo complesso sul sistema immunitario potenziandone la fisiologica capacità protettiva nei confronti di agenti esterni ed i fisiologici processi dell’invecchiamento. Questo effetto dipenderebbe tra l’altro da azioni antiossidanti, antinfiammatorie, da modulazione neuro trasmettitoriale, per riduzione dei livelli di cortisolo dipendente da regolazione dell’attività dell’asse ipotalamo-ipofisi-surrene, e da altri complessi meccanismi. Evidenze emergenti suggeriscono che queste proprietà di Withania somnifera possano essere correlate ai suoi effetti immunomodulatori grazie all’azione dei withanolidi che sono particolarmente concentrati nelle radici e nelle foglie. Ad esempio nello studio segnalato nella newsletter è stato osservato, nel gruppo di trattamento, un aumento significativo dei linfociti e del conteggio delle immunoglobuline. Withania somnifera è nota per stimolare l’immunità cellulo-mediata, IgM e IgG e per promuovere un notevole miglioramento nella proliferazione e differenziazione dei linfociti come indicato dai marcatori di superficie dei linfociti T (CD3+, CD4+ e CD8+) e linfociti B (CD19+). [12] [13] Sempre nello studio segnalato, si osserva un aumento significativo delle cellule T, delle cellule B e delle cellule NK nel gruppo di trattamento ed analogamente nel gruppo placebo quando è passato al trattamento. È stato clinicamente dimostrato che Withania somnifera migliora la qualità generale e l’efficienza del sonno in soggetti con insonnia e sonno non ristoratore. [6] I risultati dello studio segnalato risultano rilevanti in questo contesto poiché l’estratto di Ashwagandha standardizzato in withanolidi glicosilati è associabile ad aumenti di DHEA-S e abbassamento dei livelli di cortisolo (ormone dello stress). [14] Tandon e Yadav [15] hanno esaminato 30 studi clinici sull’uomo condotti con Withania somnifera, stabilendo una ragionevole sicurezza e efficacia nell’ipotiroidismo subclinico, nello stress cronico, nell’insonnia e ansia, nel miglioramento cognitivo, nell’infertilità e come coadiuvante della chemioterapia. Gli effetti adattogeni fisici sono stati studiati in tre studi clinici, uno dei quali [16] ha riportato un consumo di ossigeno significativamente aumentato, V-max e potenza media assoluta e relativa in condizioni di esercizio con integrazione di Withania somnifera, un esito che può essere rilevante nella convalescenza da malattie respiratorie. Diversi studi in vivo su Withania somnifera suggeriscono la sua capacità di influenzare più livelli della funzione immunitaria che comprendono sia l’immunità innata che adattativa. Diversi studi sugli animali hanno dimostrato che gli estratti alcolici di Withania somnifera aumentano la produzione di globuli bianchi. [17] [18] Molti studi sono stati condotti sulla radice e sulle foglie di Ashwagandha in cui si trova in abbondanza la withaferina A che è un composto associato a una potente attività immunomodulante e antinfiammatoria ed anche estratti di pianta intera dimostrano di favorire l’aumento dell’attività delle cellule immunitarie (macrofagi), di enzimi lisosomiali che agiscono come “disintossicanti” eliminando anche sottoprodotti delle cellule immunitarie. È stato dimostrato che anche gli estratti alcolici della pianta intera di Withania somnifera aumentano l’attività fagocitaria dei macrofagi, riducono le reazioni di ipersensibilità immunitaria, e stimolano la generazione di cellule immunitarie (linfociti T). [19] L’impatto di Withania somnifera sull’immunità adattativa può essere particolarmente utile dopo l’esposizione a patogeni, inclusi batteri e virus. Nei topi a cui è stato somministrato un estratto di foglie di Withania somnifera standardizzato, per 2 settimane è stata osservata una promozione della risposta Th1 attraverso coinvolgimento dell’espressione di interferone-gamma e di linfociti B e miglioramento dell’espressione dei linfociti T (CD3+, CD4+ e CD8+), insieme alla co-stimolazione di CD80 e integrine. [12] Malik et al. nel 2007 hanno dimostrato che l’estratto di radice di Withania somnifera migliora l’immunità cellulo-mediata prevalentemente attraverso il potenziamento dell’immunità Th1. [20] Diversi studi condotti con Withania somnifera hanno mostrato un aumento significativo dei livelli di espressione di cellule CD3+, CD4+, CD8+, CD19+, CD45+ e NK in 30 giorni di trattamento. Nello studio segnalato è stato osservato un ulteriore aumento significativo (rimanendo nel range della normalità) del livello di queste cellule anche nel periodo di estensione di ulteriori di 30 giorni, indicando una immunomodulazione positiva con l’uso continuato di Withania somnifera (60 gg). [44]

Razionali di attività immunomodulatoria. Una prima evidenza è relativa alla capacità degli estratti di Ashwagandha di incrementare la proliferazione cellulare LPS indotta e quella del withanolide A isolato di incrementare la risposta dei linfociti e la proliferazione cellulare nella milza. [35] [21] La proliferazione dei linfociti esercitata da Ashwagandha può verificarsi in situazioni normali, ed anche in casi di elevato livello di infiammazione come dimostrato in un modello di artrite indotta nei ratti nel quale 1.000 mg/kg di estratto al giorno, per una settimana, hanno ridotto la sintomatologia artritica. [23]

Razionali di attività sull’immunosoppressione. È stato inoltre dimostrato che la soppressione dell’attività delle cellule Th1 indotta da desametasone viene contrastata in vitro dai withanolidi mentre solo il withanolide A si dimostra in grado di sopprimere l’espressione di IL-4. [25] In ratti con elevati livelli di corticosteroidi nel siero, l’estratto acquoso della radice di Ashwagandha, è stato in grado di contrastare significativamente la riduzione della conta delle cellule T associandosi ad una riduzione del cortisolo circolante. [26] Il withanolide A isolato è stato in grado di ridurre le concentrazioni di corticosterone (a dosaggi di 0.25-1 mg/kg per via orale), in ratti sottoposti a stress; questo effetto si è associato alla conservazione della funzione dei linfociti T. [21] La witaferina A dimostra di sopprimere la secrezione di IL-10 da parte di cellule mieloidi e di ridurre la formazione di ROS, correlandosi con un meccanismo STAT3 [27], dipendente (Signal transducer and activator of transcription 3); in relazione al coinvolgimento delle MDSCs (Myeloid-derived suppressor cell) la witaferina A ha conservato positivamente l’equilibrio di CD4 +, CD8 + e linfociti T e ridotto peso del tumore nei topi. [27] La secrezione di IL-10 da MDSCs (myeloid derived suppressor cells) è STAT3 dipendente [28] e l’assunzione orale di 100-400 mg/kg di estratto etanolico al 50 %, ha dimostrato di sopprimere l’attività in vivo di STAT3 in nove giorni. [28] La witaferina A e il withanolide A sembrano ridurre la soppressione, indotta da corticosteroidi, dell’attività delle cellule Th1. Questo effetto è in parte dovuto alle capacità antistress di Ashwagandha (per riduzione del cortisolo) ma può anche essere correlato alla inibizione STAT3 che comporta una riduzione della soppressione (non cortisolo dipendente) dei linfociti T. L’espressione di recettori CD4 + e CD8 + recettori su linfociti T, dopo immunosoppressione indotta con ciclosporina, viene in parte preservata da Ashwagandha che tuttavia dimostra (per assunzione orale di 100-200 mg/kg di estratto metanolico al 50%, per 14 giorni) di incrementare intrinsecamente i livelli di questi recettori. [30] L’assunzione orale di 200 mg / kg di estratto di Ashwagandha al giorno, per quattro giorni prima di un’iniezione paclitaxel dimostra di ridurre significativamente la neutropenia indotta dal paclitaxel (Taxolo), sembra essere significativamente ridotta dall’assunzione orale di 200 mg/kg di estratto di Ashwagandha al giorno, per quattro giorni prima dell’iniezione paclitaxel e negli otto giorni successivi [31] è stata osservata una riduzione degli effetti soppressivi sui neutrofili con un aumento della conta degli stessi rispetto al controllo. Nel gruppo trattato con Ashwagandha, nonostante le iniezioni di paclitaxel, gli effetti su granulociti e monociti sono stati paragonabili a iniezioni di 25μg/kg di Colony Stimulating Factor (GM, CSF). [31] Ashwagandha dimostra azioni a supporto del sistema immunitario nei confronti degli effetti immunosoppressori della ciclosporina o del paclitaxel, e gli effetti di contrasto della neutropenia sembrano essere molto efficaci.

Razionali di attività su interferoni e immunoglobuline. In un modello sperimentale, 30 mg/kg di un estratto etanolico al 50% di Ashwagandha somministrati per 15 giorni, dopo la somministrazione dell’antigene specifico SRBC il nono giorno, hanno determinato un titolo anticorpale di immunoglobuline M (IgM) del 128%, mentre il profilo globale dell’immunoglobulina G (IgG) ha evidenziato un miglioramento correlato con un forte aumento, di circa quattro volte, di IgG2a. Ashwagandha dimostra la capacità di incrementare le IgM e IFNy associato anche con la stimolazione di linfociti T. [25]

Razionali di attività sui macrofagi. Nel modello sperimentale nel ratto sottoposto a stress da freddo, Ashwagandha al dosaggio di 512.5 mcg/die, è stato in grado di incrementare la fagocitosi da parte dei macrofagi rispetto al controllo. [33] L’assunzione orale di Ashwagandha, a dosi relativamente basse, sembra contrastare significativamente la riduzione dell’attività dei macrofagi in situazioni di stress. L’ aumento dell’attività di fagocitosi, fino al 142%, è stato osservato in vivo anche in altri studi, somministrando l’estratto metanolico al 70% di Ashwagandha a 20mg/kg, tramite iniezioni intraperitoneali. [34] Un estratto etanolico al 50% di Ashwagandha (30 mg / kg a topi per 15 giorni) ha determinato un aumento della produzione delle IL,12 e del TNF, α ma non della IL-10, in un modello di riduzione dell’attività dei macrofagi indotta con desametasone. [25] Ashwagandha può stimolare l’attività dei macrofagi (produzione nitriti) quando inibita da corticosteroidi esogeni, ma anche in situazioni di normalità.

Razionali di attività sulle Cellule Natural Killer. Ashwagandha da solo o associato ad altre piante medicinali è in grado di stimolare le cellule NK in ratti portatori di tumori. [35] Ciò si verifica in topi portatori di tumore anche con la sola somministrazione orale di 100-400 mg/kg di un estratto etanolico al 50% di radice di Ashwagandha con un aumento della popolazione di cellule NK del 20-40% in nove giorni. [29] Nel modello sperimentale, Ashwagandha si è dimostrato in grado di in grado di aumentare l’attività delle cellule NK e la loro popolazione sia in animali sani sia in quelli portatori di tumori. Nell’uomo, un infuso medicinale contenente Ashwagandha (0,5%), con altre erbe medicinali (per un totale del 4,0%), somministrato a pazienti adulti, che dimostravano una bassa attività delle cellule NK, al dosaggio di 2.06 g per due mesi, ha aumentato l’attività delle cellule NK del 60% in più rispetto all’infuso placebo; [24] questo effetto è stato confermato anche in uno studio più ampio in cui, in due mesi, si è osservato l’aumento dell’attività delle cellule NK che è cessato, in tutti i soggetti della sperimentazione, alla sospensione della somministrazione dell’infuso. [24] In un altro studio, un estratto di radice di Ashwagandha, somministrato due volte al giorno, per quattro giorni insieme a latte intero, ha determinato un aumento delle cellule NK (CD56) e della relativa attività recettoriale anche se con differenze interindividuali. [45] Gli studi sulla matrice umana suggeriscono per Ashwagandha che l’attivazione delle cellule NK osservata nel modello sperimentale sembra valere anche sull’uomo.

Razionali di attività sui linfociti B. Un estratto etanolico al 50% di Ashwagandha, somministrato oralmente nel ratto per 15 giorni (somministrando l’antigene specifico SRBC al giorno 9), a dosaggi di 30 mg/kg, è stato in grado di promuovere la proliferazione di cellule B più di un dosaggio di 10 mg/kg e più del dosaggio maggiore di 100 mg/kg dello stesso estratto, accompagnandosi ad un aumento delle cellule CD19 +. [25] In un modello sperimentale in cui i ratti sono stai esposti all’antigene specifico SRBC, sia in uno stato di normalità sia in uno stato di immunosoppressione indotta con ciclofosfamide, la somministrazione orale di 100-200 mg/kg di estratto metanolico di radice al 50%, sembra aumentare il titolo anticorpale complessivo del 11,16% in condizioni normali e del 14, 30% in condizioni di immunosoppressione, tuttavia con potenza inferiore rispetto al levamisolo utilizzato come farmaco di riferimento di (2,5 mg/kg). [30] Analogamente un aumento del titolo anticorpale è stato osservato in ratti trattati con 20 mg/kg di estratto metanolico al 70% attraverso iniezioni intraperitoneali, tuttavia si è ipotizzato che questo effetto sia stato dovuto al proliferare di cellule che producono anticorpi nella milza. Ashwagandha sembra avere un effetto stimolante indiretto sui linfociti B. [34]

Razionali di attività sui linfociti T. Un estratto etanolico al 50% di Ashwagandha, somministrato oralmente a ratti, per 15 giorni (con somministrazione di antigene specifico SRBC al giorno 9), ha determinato, a dosaggi medi di 30 mg/kg, la promozione della proliferazione delle cellule T, dei CD3 + e del rapporto CD4 + / CD8 + [25]; si è ipotizzato che questo effetto sia dovuto al withanolide A che è in grado di sopprimere l’IL-4 e che è in grado di aumentare l’IFNy e l’IL-1. [25] Questi effetti sono stati osservati in ratti portatori di tumori dove il dosaggio orale di maggior potenza dell’estratto etanolico al 50% è stato di 200 mg/kg. [29] In un altro studio 25-200mg / kg di un estratto metanolico al 50% di Ashwagandha, sono stati in grado di aumentare la secrezione cellulare di IFN-gamma (interferone gamma) con minor potenza di 400 mg/kg dello stesso estratto, e la potenza dell’estratto di Ashwagandha ha superato quella di 2,5 mg/kg di Levamisolo usato come riferimento [30]; l’effetto stimolante su iL-2 a 100-200 mg/kg dell’estratto di Ashwagandha era paragonabile a quello del Levamisolo, ed in entrambi i casi si è osservato un aumento dei recettori CD4 + e CD8 + correlati [30]; questi effetti sono stati anche osservati, con potenza simile, con la sperimentazione di un estratto base acquoso di radice a 100-200 mg/kg [26] ed in vitro, questi effetti, sono risultati significativi con a bassi dosaggi di estratto etanolico al 50%. [29] Ashwagandha sembra avere un effetto stimolante dose-dipendente sulle cellule Th1, e sia in grado di aumentarne il numero di recettori e le citochine che secernono (IFNy e IL-2). Questi effetti si evidenziano dose-dipendenti fino a dosaggi di 200 mg / kg (equivalenti nell’uomo a 32 mg/kg) dell’estratto di radice, e sembrano riferibili anche alla somministrazione orale di dosaggi standard di Ashwagandha. Sempre con l’estratto etanolico al 50% è stata osservata una diminuzione costante, nel range del 15,30% dell’IL-4 così come avviene per dosaggi di 0.1-100 ng ml di withanolide A isolato. [25] [30]29] Viene inoltre osservato, per gli estratti di Ashwagandha, un lieve effetto soppressivo sulle cellule Th2 tuttavia senza alcuna influenza significativa sulla loro funzione, solitamente valutata attraverso la citochina IL-4.

Razionali di attività antibatterica. Ashwagandha sembra essere moderatamente attivo nell’inibire Trichophyton mentagrophytes (valore MIC di 3.125 mg/ml), Staphylococcus aureus (valore MIC di 6,25 mg/ml) e il suo ceppo resistente alla Meticillina noto come MRSA (valore MIC di 12.5 mg/ml). [38] Nella tubercolosi polmonare, si sono ottenute risposte positive somministrando 500 mg di Ashwagandha due volte al giorno per 28 giorni insieme ai farmaci anti-tubercolosi standard (rifampicina, pirazinamide, ethambutol, isoniazide) [39]; nello studio si è notato un aumento significativo delle IgG e delle IgM nonché della conta totale dei globuli bianchi (monociti e eosinofili) senza influenzare neutrofili e linfociti, con una significativa riduzione della carica batterica rispetto al gruppo di controllo. [40]

 

Lo studio in breve 

Un recentissimo (agosto 2021) studio clinico disponibile in PubMed ha valutato gli effetti immunomodulatori di Withania somnifera Dunal sull’uomo. In questo studio randomizzato in doppio cieco, crossover, controllato con placebo, i soggetti sono stati assegnati a ricevere 60 mg di estratto di Withania somnifera o placebo per un periodo di 30 giorni in cieco e per altri 30 giorni successivi in aperto. Lo studio ha concluso che, dopo il periodo di trattamento di 30 giorni in cieco il gruppo di soggetti trattati ha riportato un aumento significativo (p < 0,05) delle Ig (IgA, IgM, IgG, IgG2, IgG3 e IgG4), delle citochine (IFN-γ, IL-4), di TBNK (cellule CD45+, CD3+, CD4+, CD8+, CD19+, NK) mentre le cellule TBNK del gruppo placebo hanno mostrato una diminuzione significativa (p <0,05) mentre le Ig e le citochine non hanno mostrato nessuna variazione (p > 0,05). Nel periodo di estensione dal giorno 30 al giorno 60, i soggetti che erano stati trattati con placebo hanno mostrato un aumento significativo (p <0,05) di Ig, citochine e cellule TBNK e i soggetti che erano stati trattati con Withania somnifera nei primi 30 giorni, hanno mostrato un ulteriore significativo miglioramento (p <0.05) nelle Ig, nelle citochine e nelle cellule TBNK. Non sono stati riportati eventi avversi nello studio. Lo studio ha concluso che l’estratto di Withania somnifera ha migliorato significativamente il profilo immunitario dei soggetti sani modulando le risposte immunitarie innata e adattativa sistemi immunitari. I risultati dello studio suggeriscono che gli estratti di Withania somnifera possono aiutare a rafforzare il sistema immunitario in soggetti a rischio di infezione e durante la diffusione le infezioni.

Premessa dello studio è la conoscenza che il sistema immunitario dei mammiferi (che agisce a tre livelli di difesa attraverso la barriera fisica, il sistema immunitario innato e il sistema immunitario adattativo) [41] risponda agli immunomodulatori che possono essere macroscopicamente classificati in immunostimolanti e immunosoppressori. Gli immunostimolanti migliorano i meccanismi di difesa dell’organismo e sono usati per prevenire infezioni comuni e oggi anche del cancro, mentre gli immunosoppressori sopprimono l’attività del sistema immunitario e prevengono ad esempio la risposta autoimmune e i rigetti nel trapianto d’organo. Gli immunomodulatori di origine vegetale, che sono numericamente rilevanti, rappresentano un promettente campo di ricerca. Tra questi, Ashwagandha (Withania somnifera o WS) è menzionato, sin dall’antichità, nel gruppo di farmaci Rasayana nella medicina tradizione dell’India ed è stato ampiamente studiato come agente immunomodulatore. Withania somnifera Dunal contiene principalmente withanolidi glicosilati che esercitano la loro azione immunomodulante mobilizzando e attivando i macrofagi e inducendo ad esempio la proliferazione negli splenociti murini. [42] È stato ipotizzato che quest’azione immuno-regolatoria cellulare fosse alla base dell’utilizzo come Rasayana in Ayurveda, e che WS potrebbe essere un promettente candidato tra i fito-farmaci per affrontare infezioni virali o microbiche agendo sull’immunità indotta per prevenire o controllare le infezioni. Il coinvolgimento delle cellule immuno-regolatrici da parte di estratti di WS potrebbe avere diverse funzioni, come la regolazione della presentazione dell’antigene e il controllo del microambiente immunosoppressivo insieme a un miglioramento del fisiologico ambiente delle citochine per una fisiologica funzione delle cellule T effettrici. [43]

Questo studio nello specifico è stato condotto per valutare gli effetti immunomodulatori di un estratto di WS, a confronto con placebo, in una popolazione sana di mezza età esposta a influenze ambientali e nel cambiamento stagionale. Questo studio che risulta essere uno dei pochissimi disponibili sugli effetti di WS sull’immunità nell’uomo ha una rilevanza significativa considerando la recente prevalenza di infezioni virali e microbiche in tutto il mondo. [44] Lo studio pilota monocentrico a braccio parallelo, controllato con placebo, in doppio cieco è stato condotto al PGH Hospital di Delhi. Lo studio è stato condotto con un periodo di trattamento di 30 giorni in cieco e con un periodo di estensione in aperto di altri 30 giorni. Nel periodo di estensione è avvenuto il cross-over tra i gruppi trattamento e placebo; in questa fase, nel gruppo originariamente trattato con WS non è stato somministrato placebo ipotizzando effetti di trascinamento degli effetti di WS. L’obiettivo primario dello studio è stato quello di determinare l’effetto immunomodulatore di WS alla fine del periodo di studio dei primi 30 giorni. [44] Per lo studio sono stati arruolati 24 soggetti sani, adulti, di sesso maschile e femminile, e di età compresa tra 45 e 72 anni secondo criteri di inclusione ed esclusione previsti dallo studio. I partecipanti non dovevano aver assunto integratori vitaminici/minerali/dietetici o erboristici 1 mese prima di essere arruolati nello studio e si sono impegnati a non utilizzare altri prodotti come vitamine, minerali, dietetici o erboristici fino al termine dello studio. Nel gruppo di intervento è stato somministrato un estratto etanolico in polvere di radici e foglie essiccate di Withania somnifera. I soggetti sono stati randomizzati a ricevere una dose giornaliera con una capsula da 180 mg che rendeva disponibile 60 mg di WS titolati per 21 mg di withanolidi glicosilati (trattamento) o un placebo (polvere di riso tostato) per 30 giorni in doppio cieco. Dopo la fine del periodo di studio dei primi 30 giorni in doppio cieco, lo studio è stato esteso per altri 30 giorni di trattamento (in aperto) in cui i pazienti trattati con placebo nei primi 30 giorni sono passati al gruppo di trattamento ed i pazienti del gruppo di trattamento hanno continuato l’assunzione del prodotto fino al termine dello studio. [44] Per la valutazione dei risultati sono stati raccolti i campioni di sangue per TBNK, citochine e immunoglobuline (campioni mattutini a digiuno) il giorno della randomizzazione, il 30° giorno (±2 giorni) di studio e al giorno 30 del periodo di estensione dello studio. I campioni di sangue per analisi biochimiche e di sicurezza sono stati raccolti allo screening, il 30° giorno (±2 giorni) di completamento dello studio e il 30° giorno di completamento dell’estensione. [44] Nello studio, tutti i 24 partecipanti selezionati sono stati randomizzati e arruolati nello studio. I partecipanti sono stati iscritti da metà agosto a metà dicembre con variazioni della temperatura nella regione da 34-27 °C a 22-9 °C.

L’analisi intragruppo delle immunoglobuline (Ig) indica che solo il gruppo che ha ricevuto l’estratto di Withania somnifera al posto del placebo ha mostrato un aumento significativo del livello di IgA, IgG2, IgG3, IgG4, IgG e IgM al giorno 30 dello studio. I livelli di tutte le Ig di tutti i partecipanti del gruppo placebo quando sono passati al gruppo di trattamento nel periodo di estensione hanno analogamente mostrato un aumento significativo. I partecipanti che hanno continuato a assumere Withania somnifera per il periodo totale di 60 giorni hanno avuto ulteriormente miglioramenti significativi di tutte le immunoglobuline. L’analisi di Bland-Altman ha indicato una differenza media (bias) tra i due periodi di trattamento (giorno 0-30 e giorno 30-60) in entrambi i gruppi; il dato è risultato statisticamente significativo (p <0.05) e clinicamente rilevante per l’aumento del livello di immunoglobuline nel gruppo trattato per entrambi i periodi. Il gruppo placebo non ha avuto un aumento statisticamente significativo alla fine dei primi 30 giorni, ma quando il gruppo placebo è passato al gruppo di intervento ha dimostrato variazioni statisticamente significative (p <0.05) e clinicamente rilevanti. [44]

L’analisi intragruppo delle citochine indica che il gruppo di trattamento ha mostrato un aumento significativo del livello di IFN (p < 0,001) e IL-4 (p = 0,047) alla fine dei primi 30 giorni di trattamento. I livelli di IFN e i livelli di IL-4 nei partecipanti che sono passati dal gruppo placebo al gruppo di trattamento nel periodo di estensione dello studio hanno mostrato un aumento significativo solo per IFN. I partecipanti che hanno continuato ad assumere il prodotto di trattamento per gli ulteriori 30 giorni non hanno dimostrato ulteriori aumenti significativi dei livelli di IL-4 e nessun ulteriore cambiamento significativo nei livelli di IFN. IFN e IL-4 erano simili tra i gruppi al basale e significativamente aumentati nel gruppo di trattamento solo alla fine dei primi 30 giorni. L’analisi di Bland Altman ha indicato una differenza media (bias) tra i due periodi di tempo (giorno 0-30 e giorno 30-60) in entrambi i gruppi. Questo dato era statisticamente significativo (p < 0,05) e clinicamente rilevante per l’aumento di IL-4 e IFN nel gruppo di trattamento per il primo periodo e non significativo per il secondo periodo. Il placebo non ha avuto un aumento statisticamente significativo per IL-4 e IFN nei primi 30 giorni ma quando il gruppo placebo è passato al gruppo di intervento ha mostrato un aumento statisticamente significativo (p < 0,05) e clinicamente rilevante per IFN ma non per IL-4. [44]

L’analisi intragruppo dei conteggi assoluti dei linfociti nel gruppo di trattamento indicava un aumento significativo del numero di CD45+, CD3+, CD4+, CD8+, CD19+ e cellule CD16+/CD56+ alla fine dei primi 30 giorni dello studio. Il gruppo placebo ha mostrato una significativa diminuzione di CD45+, CD3+, CD4+ e CD8+ e nessun cambiamento significativo di CD19+ e cellule CD16+/CD56+. I livelli di CD45+, CD3+, CD4+, CD8+, CD19+ e CD16+/CD56+ dei partecipanti passati dal gruppo placebo al gruppo di intervento nel periodo di estensione dello studio hanno mostrato un aumento significativo. I partecipanti che hanno continuato il trattamento per il totale periodo di 60 giorni hanno avuto un ulteriore aumento significativo dei loro valori di CD45+, CD3+, CD4+, CD8+, CD19+ e conta CD16+/CD56+. Il rapporto CD4+:CD8+ si è conservato durante lo studio nel gruppo di trattamento nel gruppo placebo alla fine del periodo di proroga. Un’analisi tra i gruppi ha rivelato che CD45+, CD3+, CD4+ e CD8+, CD19+ e CD16+/CD56+ erano simili tra i gruppi al basale e significativamente aumentati nel gruppo di trattamento alla fine dei primi 30 giorni dello studio. L’analisi di Bland-Altman ha indicato una differenza media (bias) tra i due periodi (giorno 0-30 e giorno 30-60) in entrambi i gruppi. Questo dato era statisticamente significativo (p < 0,05) e clinicamente rilevante per l’aumento del livello dei linfociti nel gruppo di trattamento in entrambi i periodi. Il placebo ha mostrato un effetto di diminuzione statisticamente significativo e clinicamente rilevante ad eccezione delle cellule CD19+ e NK, ma il gruppo placebo quando è passato al gruppo di trattamento ha avuto un aumento statisticamente significativo (p <0,05) ed è stato clinicamente rilevante. [44]

Le analisi biochimiche e di sicurezza indicano che nel gruppo di trattamento, c’è stato un aumento statisticamente significativo della conta piastrinica (p = 0,017), della conta assoluta dei neutrofili (p = 0,001), dei linfociti (p < 0,001) e dei leucociti (p < 0,001) alla fine del periodo dei primi 30 giorni dello studio mentre emoglobina, globuli rossi, ematocrito, eosinofili, basofili e monociti non presentavano differenze significative. Nel gruppo placebo le piastrine erano significativamente aumentate (p = 0,006) ma i linfociti significativamente diminuiti (p <0,001) e altri parametri CBC non hanno avuto alcun cambiamento significativo. Nei partecipanti che dal gruppo placebo sono passati al gruppo di trattamento c’è stato un significativo aumento medio di linfociti (p = 0.008) al termine del periodo di estensione di 30 giorni. Nei soggetti che hanno continuato con il trattamento si è verificato un aumento significativo dell’ematocrito (p= 0,021), dei conteggi di piastrine (p = 0,009), neutrofili (p < 0,001), monociti (p = 0,033), linfociti (p = 0,002), e leucociti (p <0,001) mentre il resto dei parametri CBC non ha avuto alcun significativo cambiamento. La creatinina sierica nel gruppo di trattamento è diminuita significativamente dopo 30 giorni (p = 0,020) e 60 giorni (0,007). Nessun evento avverso è stato riportato in entrambi i gruppi durante i periodi di studio. [44]

 

Considerazioni conclusive

Questo studio clinico pilota, randomizzato e controllato dimostra per la prima volta che un estratto di Withania somnifera standardizzato per withanolidi glicosilati possiede potenti proprietà immunostimolanti. Lo studio dimostra per l’estratto in questione l’attività di up-regolazione di Th2 come evidenziato dalla maggiore secrezione di IL-4 insieme all’espressione potenziata di Th1 (IFN-γ) suggerendo fortemente il ruolo positivo di WS in condizioni in cui è richiesta la modulazione Th1/Th2. Withania somnifera ha potenziato la proliferazione di CD4+/CD8+ senza alterarne il rapporto e le cellule NK insieme ad un’aumentata espressione di CD3+/CD19+/CD45+ e ad un aumento della circolazione di anticorpi e cellule che formano anticorpi. I risultati di questo studio dimostrano che WS grazie alla sua attività immunostimolante è una preziosa aggiunta in integratori a base di piante medicinali per il potenziamento dell’immunità. Questi effetti coinvolgono sia l’immunità innata che adattiva. Questo studio clinico è uno dei pochi disponibili che ha mostrato che un estratto di WS standardizzato per withanolidi glicosilati può aumentare entrambe le immunoglobuline, come risposta dell’immunità innata, ed aumenta IFN-gamma e linfociti T CD3+ e CD4+ nell’uomo. I risultati del presente studio sono coerenti con quanto dimostrato in precedenza in vivo, incluso un aumento dei livelli di espressione delle citochine T-helper 1 (Th1), così come della conta delle cellule T CD4+ e CD8+. Allo stesso modo, è emerso con evidenza nello studio un aumento significativo delle cellule CD3+, CD4+, CD8+, CD19+ e NK con 30 giorni di trattamento. Nello studio il livello di IFN-γ risulta aumentato nel gruppo WS rispetto al basale al giorno 30 e dal giorno 30 al giorno 60, l’aumento non è stato elevato nei livelli di IL-4 (intervallo normale IFN-γ (70–200 pg/ml), IL-4 (4–10 pg/ml). Ciò indica che nel gruppo trattato con WS, c’era una polarizzazione iniziale della risposta di tipo Th2 (IL-4) seguita da risposta di tipo Th1 (IFN-γ). Questi risultati suggeriscono che il gruppo di trattamento con Withania somnifera aveva dimostrato un’efficace risposta immunitaria di tipo Th2 (IL-4). L’aumento dei livelli di citochine è stato concomitante anche con un aumento dei linfociti B (CD19+). [44]

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Ajit Tharakan 1, Himanshu Shukla 2, Irin Rosanna Benny 3, Matthan Tharakan 4, Lekha George 5 and Santhosh Koshy 5

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